Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)
Fluorescence resonance enerzjy oerdracht (FRET) is in net-strieljende enerzjy oerdracht proses wêryn de donor optein steat enerzjy wurdt oerbrocht nei de akseptor opwûn steat troch de ynteraksje fan intermolecular elektryske pearen.Dit proses befettet gjin fotonen en is dêrom net-strielend.Dizze assay hat de foardielen om fluch, gefoelich en ienfâldich te wêzen.
De kleurstof brûkt yn 'e FRET-assay kin identyk wêze.Mar yn 'e measte tapassingen wurde eins ferskate kleurstoffen brûkt.Koartsein is de oerdracht fan ljochtresonânsje-enerzjy de oerdracht fan in pear dipolen fan 'e donor (ferve 1) nei de akseptor (ferve 2) as de donorgroep optein is.Yn 't algemien oerlapet it emisjespektrum fan' e Donor-fluorofoorgroep it absorptionsspektrum fan 'e Acceptor-groep."As de ôfstân tusken de twa fluorofoaren passend is (10 - 100 A), kin de oerdracht fan fluorofoorenerzjy fan 'e donor nei de akseptor wurde waarnommen."De metoade fan enerzjy oerdracht hinget ôf fan 'e gemyske struktuer fan' e receptor:
1. Wurdt omset yn molekulêre trilling, dat is, it ljochte ljocht fan enerzjyferfier ferdwynt.(De receptor is in ljocht quencher)
2. De emisje is yntinsiver as de receptor sels, wat resulteart yn in redshift yn it sekundêre fluorescinsjespektrum.(Receptors binne ljochtemitters).
De donorgroep (EDANS) en akseptorgen (DABCYL) binne unifoarm keppele oan it natuerlike substraat fan HIV-protease, en as it substraat net loskeppele is, kin DABCYL EDANS quenle en dan net te detektearjen wurde foar fluor.By it ûntbrekken fan HIV-1 protease wurdt EDANS net mear útsteld troch DABCYL, en kinne EDANS luciferases dêrnei wurde ûntdutsen.De beskikberens fan protease-ynhibitoren kin wurde kontrolearre troch feroaringen yn 'e fluorescensintensiteit fan EDANS.
FRET-peptiden binne handige ark om peptidase-nonspesifisiteit te studearjen.Sûnt it reaksjeproses kin kontinu kontrolearre wurde, biedt it in handige metoade foar it opspoaren fan enzymaktiviteit.De glâns produsearre nei de hydrolyse fan peptide-obligaasjes troch de donor/akseptor jout in mjitte fan enzymaktiviteit by nanomolêre konsintraasjes.As it FRET-peptide yntakt is, toant it in hommelse ferdwining fan 'e ynterne flits, mar as elke peptidebân tsjinoer de donor / akseptor brekt, jout it in flits út, dy't kontinu kin wurde ûntdutsen en de enzymaktiviteit kin dan wurde kwantifisearre.
Post tiid: Aug-14-2023